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双分子荧光互补技术(BiFC)
双分子荧光互补(Bimo-lecular fluorescence complementation,简称BiFC)技术,可以直观、快速地判断目标蛋白在活细胞中的定位和相互作用。
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酵母双杂交系统(Y2H)
酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid system)是将待研究的两种蛋白质A和B的编码DNA序列分别克隆(融合)到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域(B-BD)和转录激活域(A-AD)上,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。
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GUS染色实验
GUS(β-葡萄糖苷酶)染色实验是通过检测β-葡萄糖苷酶活性来研究植物组织中目标基因的表达情况,通常用于研究植物中特定基因的转录调控。因为绝大多数植物细胞内不存在内源GUS活性,因此GUS基因被广泛用作转基因植物的报告基因。 GUS是一种β-葡萄糖苷酶,能与底物X-葡萄糖苷(X-Gluc)在GUS的作用下被水解,生成可观察的蓝色产物。并且可以与底物4-甲基伞型酮-β-葡萄糖醛酸苷(MUG)反应产生荧光物质4-甲基伞型酮(MU),其含量可由酶标仪测出。因此,我们可以根据单位质量的植物总蛋白在单位时间内产生的荧光物质的多少来定量检测GUS的含量,进而检测启动子的表达强度。
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酵母单杂交(Y1H)
酵母单杂交系统(Yeast one-hybrid system)是一种研究蛋白质和特定DNA序列相互作用的技术方法,酵母单杂交是根据DNA结合蛋白(即转录因子)与DNA顺式作用元件结合调控报告基因表达的原理。
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双荧光素酶报告实验(Dual-LUC)
荧光素酶报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(Firefly lucifer-ase)活性的一种报告系统。 为了减少实验误差,同时转染一个能稳定表达的海肾荧光素酶(Renilla luciferase)的质粒作为内参,催化腔肠素氧化产生蓝光,所以叫双荧光素酶报告基因检测系统。现已成为研究转录因子参与基因调控,以及miRNA和其靶基因互作验证的有效手段。
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