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技术服务
Technical service

Halo Pull Down

检测已经蛋白质之间的相互作用,鉴定与已知蛋白相互作用的未知蛋白

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Halo Pull Down技术是将Halo标签的融合蛋白固相化到磁珠上,与细胞总蛋白进行孵育,鉴定与之相互作用的蛋白。该方法可以鉴定与已知蛋白相互作用的未知蛋白,也可以鉴定两个已知蛋白间是否存在相互作用。

我们的Halo PullDown技术服务利用无细胞蛋白表达系统来表达Halo标签的融合蛋白(诱饵蛋白),节省时间,蛋白表达载体构建成功后,不需要转化和鉴定,可直接表达目的蛋白。 蛋白表达成功后进行纯化,将纯化后的蛋白与细胞裂解液孵育一段时间后,洗去上清蛋白,将与目的蛋白结合的蛋白洗脱,并进行质谱检测。


步骤内容交付内容周期
载体构建
  • 客户提供目的蛋白对应的CDS的序列或质粒,

  • 克隆至合适的表达载体,

  • 质粒测序,

  • 质粒制备。

测序结果1-2周
无细胞表达+纯化
  • 用小麦芽胚蛋白表达体系进行蛋白表达,

  • 蛋白表达评估 (Western Blot) 。

表达评估报告1周
Pull Down
  • 细胞裂解,

  • 目的蛋白和总蛋白孵育,

  • 洗脱与目的蛋白结合的蛋白。

银染结果1周
质谱检测
  • 将洗脱的蛋白进行质谱鉴定。
质谱结果2周


客户提供材料交付结果

新鲜样本(组织或者细胞):细胞数量>2.7ⅹ107

组织样本>3g

载体测序结果

实验过程图

质谱结果


流程图.png

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