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技术服务
Technical service

蛋白Pull down

检测已经蛋白质之间的相互作用,鉴定与已知蛋白相互作用的未知蛋白

真核表达系统,蛋白更接近体内结构

没有细胞内干扰因素的限制,表达成功率高

蛋白表达载体构建成功后,不需要转化和鉴定,可直接表达目的蛋白,节省时间

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体外蛋白表达与Pull down技术相结合,表达出目的蛋白和标签蛋白(Halo,GST,His等)的融合蛋白,不受抗体和物种限制,仅借助标签的亲和介质将目标蛋白纯化出来,使用Pull down技术,将目标蛋白与互作的蛋白“下拉”,进而利用Western Blot或者质谱鉴定互作蛋白。蛋白Pull down实验还可以同时表达两个蛋白,进行点对点的互作验证,也可以仅表达蛋白质的结合区域,确定两个蛋白结合的结构域。

本公司能够提供Halo,GST或FLAG等多种标签的Pull down技术服务。

Halo/FLAG-tag pull down是使用基于真核的体外表达系统来表达目的蛋白,目的蛋白携带Halo/FLAG标签;GST-tag pull down是使用基于原核的体外蛋白表达系统,或者大肠杆菌诱导表达目的蛋白,目的蛋白携带GST或His标签。


Halo/FLAG-tag pull down技术优势:

真核表达系统,蛋白更接近体内结构

没有细胞内干扰因素的限制,表达成功率高

蛋白表达载体构建成功后,不需要转化和鉴定,可直接表达目的蛋白,节省时间


步骤内容交付内容周期
载体构建
  • 客户提供目的蛋白对应的CDS的序列或质粒,

  • 克隆至合适的表达载体,

  • 质粒测序,

  • 质粒制备。

测序结果1-2周
无细胞表达+纯化
  • 用小麦芽胚蛋白表达体系进行蛋白表达,

  • 蛋白表达评估 (Western Blot) 。

表达评估报告1周
Pull Down
  • 细胞裂解,

  • 目的蛋白和总蛋白孵育,

  • 洗脱与目的蛋白结合的蛋白。

银染结果1周
质谱检测
  • 将洗脱的蛋白进行质谱鉴定。
质谱结果2周


客户提供材料交付结果

新鲜样本(组织或者细胞):细胞数量>2.7ⅹ107

组织样本>3g

载体测序结果

实验过程图

质谱结果


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2023年12月,北京林业大学和蓝景科信合作,在植物学主流学术期刊Plant Stress(IF=5.0)上,发表了题为“Populus euphratica CPK21 interacts with heavy metal stress-associated proteins to mediate Cd tolerance in Arabidopsis”的研究成果。该研究借助HaloTag pull-down技术鉴定了胡杨CPK21的互作蛋白,为揭示胡杨CPK21调控植物Cd耐受的分子机制研究提供了技术支撑。

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原文链接:https://doi.org/10.1016/j.stress.2023.100328



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