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Co-IP/Co-IP-MS

检测已经蛋白质之间的相互作用,鉴定与已知蛋白相互作用的未知蛋白

蛋白的结合是在细胞内完成,能够反应天然状态下的蛋白质相互作用

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免疫共沉淀(Co-IP)以抗体与抗原的特异性结合为基础,研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典方法。利用免疫共沉淀可以检测两个已知蛋白之间的相互作用,或者寻找与已知蛋白相互作用的未知蛋白。免疫共沉淀的优势在于蛋白的结合是在细胞内完成,能够反应天然状态下的蛋白质相互作用,结果更加真实可靠。


实验原理

当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质相互作用被保留了下来,使用结合抗体的磁珠与细胞裂解液共同孵育,抗体会和诱饵蛋白特异性结合,同时与诱饵蛋白结合的蛋白也会固定在磁珠上,洗去上清,再将磁珠上的蛋白洗脱下来进行免疫印迹检测或者质谱检测。

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